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大鼠nectin-4()ELISA試劑盒免費代測

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資料簡介

  

我司正在進行“積分換豪禮”,“預存返現”,“推薦享現金紅包”等優惠活動,詳情可來電咨詢我司業務員
 
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中大鼠nectin-4()的含量。
有效期:6個月
保存條件:2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
 
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包大鼠nectin-4()捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顔色的深淺和樣品中的大鼠nectin-4()呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
 
樣本處理及要求
1.  血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過夜後于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,标本采集後30分鐘内于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重後将組織剪碎。将剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要适當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反複凍融。最後将勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4.  細胞培養物上清或其它生物标本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
注:标本溶血會影響最後檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。

标本處理
1.  本公司隻對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。
2.  實驗前應預測标本含量,如果标本濃度過高,應對标本進行稀釋,使稀釋後的标本符合試劑盒的檢測範圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。标本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3.  若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4.  使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導緻ELISA實驗結果偏差。
5.  若樣本為細胞培養上清,因該類樣本幹擾因素較多,如:細胞狀态、細胞數量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6.  某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本産品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7.  建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導緻實驗結果偏差。
 
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶标儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
 
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶标闆
8孔×12
8孔×6
标準品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
樣本稀釋液
6mL
3mL
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進行稀釋
底物A
6mL
3mL
底物B
6mL
3mL
終止液
6mL
3mL
封闆膜
2張
2張
說明書
1份
1份
自封袋
1個
1個
1.  标準品濃度依次為:240、120、60、30、15、0 pg/mL
2.  經過大量正常标本檢驗,标本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍内,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大标準品濃度時,可用樣本稀釋液将标本進行适當稀釋後再進行實驗。
 
注意事項
1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準确結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用後立即冷藏保存試劑。
2. 洗闆不正确可以導緻不準确的結果。在加入底物前确保盡量吸幹孔内液體。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。
3. 消除闆底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顔色,已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和标本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷闆條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期産品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置
 
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡後方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
 
操作步驟
1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需闆條,剩餘闆條用自封袋密封放回4℃。
2.  設置标準品孔和樣本孔,标準品孔各加不同濃度的标準品50μL;
3.  樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
4.  除空白孔外,标準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)标記的檢測抗體100μL,用封闆膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體,吸水紙上拍幹,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍幹,如此重複洗闆5次(也可用洗闆機洗闆)。
6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL,15min内,在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
實驗結果計算
所測标準品的OD值為橫坐标,标準品的濃度值為縱坐标,在坐标紙上或用相關軟件繪制标準曲線,并得到直線回歸方程将樣品的OD值代入方程,計算出樣品濃度
 
試劑盒性能
1.  檢測範圍7.5 pg/mL  240 pg/mL
2.  靈敏度:最低檢測濃度小于1.0 pg/mL
3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.  重複性:闆内變異系數小于10% ,闆間變異系數小于15% 
 
說明
1.  由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本産品可能存在一定的質量技術風險。
2.  最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關,請務必準備充足的标本備份。
3.  不同批次的同一産品可能會有少許差别,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據試劑盒内說明書進行實驗操作,網站電子版說明書僅作參考。
4.  隻有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的産品。隻有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結果。
 
問題解答
若實驗效果不好,請及時對顯色結果拍照,保留所用闆條及未使用試劑,并妥善保存,然後聯系我公司技術支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題
可能原因
解決方案
标準曲線差
吸取及洗滌不充分
充分的吸取及洗滌
移液不精确
檢查和校正移液器
精密度低
洗滌不充分
按說明書要求充分洗滌和浸泡
混勻不充分和吸取試劑不足
充分混勻和吸取試劑
重複利用吸頭、容器和覆膜
使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜
加樣不精确
檢查和校正移液器
O.D值低
每孔加的試劑量不精确
校正移液器,精确加入試劑
溫育時間不正确
保證充足的溫育時間
溫育溫度不正确
試劑要平衡至室溫并保證準确的溫育溫度
酶标記物或底物失效
通過混合酶标記物和底物,顔色應迅速顯現來檢查
沒有加入終止液
按照說明書實驗操作步驟加入終止液
超出讀數時間讀數
在說明書推薦的讀數時間内讀數
樣本值
不正确的樣本儲存方式
正确儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗
不正确的樣本收集和處理方法
采取正确的樣本收集和處理方法
待測物質在樣本中含量低
使用新鮮樣本,重複實驗
 
相關産品:ELISA試劑盒  

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